1 准备工作
1.1 把水浴锅打开,温度设置成37℃(注意水浴锅里的水位线是否在最低要求的水位线之上);
1.2 用DMSO把化合物配置成浓度为10mg/mL的储备液(如果化合物没有溶解,可降低浓度以便化合物溶解),待用;
1.3 合理设计实验的纸质排版、电脑上的排版(样品浓度低的排在前面);
2 实验步骤
2.1 取5µL储备液+495µL Buffer(根据实验要求选择不同酸碱度的Buffer:pH=7.4/ pH=6.5/ pH=5.0/ pH=2.0/70%ACN),稀释100倍至100µg/mL,需要做复孔;
2.2 T0:取5µL储备液+495µL的DMSO, 需要做复孔;
2.3 放在水浴锅摇匀120分钟;
2.4 摇匀时间结束后,在4000rpm、37℃下离心20分钟;
2.5 取上清,用内标乙腈将样品稀释100倍至1µg/mL;
2.6 在LC MS/MS中进样。