化合物全血/血浆分布比例

1. 准备工作

1.1 用DMSO将化合物配制成浓度为1mM的储备液，待用；

1.2 根据实验的要求，分别取出不同物种的新鲜全血(EDTA-K2抗凝)。将全血分成2份，其中一份在4℃，转速为4000rpm的离心机中离心10分钟，取上清，得到血浆；

1.3 配制90% ACN的溶液（ACN:纯水=9:1）；

1.4 先将准备好的全血和血浆在37℃的水浴锅中预热15min；

2. 实验步骤

2 

2.1 用90% ACN的把1mM的储备稀释成100μM的工作液；

2.2 用预热好的全血、血浆分别把100μM的工作液稀释成1μM的最终需要的浓度（根据实验的安排，通常是10μL的工作液+990μL的基质）；

2.3 不同物种中的不同基质分别取出50μL（做3个平行样）在96孔板中，再加入400μL的内标乙腈进行蛋白沉淀，作为实验中的T0；

2.4 把做好的样品放在37℃的水浴锅中孵育30min；

2.5 将全血样品在37℃，转速为1750rpm的离心机中离心15min，分离得到血浆样品；

2.6 将分离得到的血浆样品及孵育30min的血浆样品，加入96孔板，每孔50μL，每个样品制备3个平行样品，再加入400μL的内标乙腈对样品进行蛋白沉淀；

2.7 在4℃的离心机中以4000rpm/min的转速离心20分钟，取上清，加入甲酸水减少乙腈的挥发（上清：甲酸水=1:1）；

2.8 在LC MS/MS中进样。

3. 实验数据计算

3 

3.1 B/P=C_B/C_P

3.2 C_B : 药物在全血中的浓度（分析物峰面积/内标峰面积比值），全血值应为药物直接加入血浆中的浓度表示全血浓度值。

3.3 C_P：药物在血浆中的浓度（分析物峰面积/内标峰面积比值），血浆浓度应为药物加入全血中，离心分离出的血浆样品浓度值。