小鼠颅内原位接种

1.制作套管针：

1.1选用自封条缠住微量进样器针头，使露出的针尖长度为3mm。

2.器械消毒：

2.1参照《手术器械的维护和消毒》SOP。

3.注射位点：

3.1注射位点位于小鼠的右额叶白质区，距冠状缝1mm，距矢状缝2.5mm。

4.接种方法：

4.1.在整个手术过程中，细胞保存于冰上；

4.2.注射麻醉剂，以后肢反射检测动物麻醉程度，用手轻捏小鼠后肢，当小鼠无反应时说明已经进入深度麻醉状态，此时开始实验；

4.3.将小鼠俯卧位平放在实验台上，头部尽量保持水平，碘伏消毒头部皮肤后用75%酒精脱碘。用手术剪在两眼中部上方0.3cm处向下沿矢状缝将皮肤剪开约0.6cm长，暴露出头骨，用消毒过的干棉签钝性剥离结缔组织直至冠状缝与矢状缝清晰可见。用左手食指和拇指固定小鼠头部，右手持针垂直水平面缓慢刺入注射位点，针尖进入颅内2mm左右，直至大脑额叶白质尾状核，缓慢地将细胞推入颅内(每2μL注射时间要大于2分钟)，过程中不能摆动针尖以免破坏大脑组织。用6-0号缝合针间断缝合皮肤层，将小鼠放置于加热垫上，待小鼠苏醒后放回笼内。

5.注意事项

5.1操作过程中要时刻注意小鼠呼吸情况，左手不可固定过紧，以免压迫气管导致窒息；

5.2注射完毕后停留30s后慢慢拔出针头，擦干溢出的脑液，缝合皮肤；

5.3在整个手术过程中，细胞保存于冰上；

5.4整个手术过程一定要无菌操作；

5.5皮肤应采用间断缝合；

5.6注射量不超过4μL。