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除了CaCO-2细胞通透性之外, MDCK-MDR1细胞通透性测试是另外一个广泛用于筛选化合物通透性的试验。MDCK-MDR1细胞是在MDCK细胞中稳定转让表达MDR1基因(ABCB1),此基因编码表达引起多种药物抗性的外排蛋白P-gp。
如同CaCo-2细胞通透性试验,MDCK-MDR通透性分析通过测定从A-B以及B-A两个不同方向的转运来计算Efflux Ratio, 从而可以判断一个分子是否存在P-gp介导的主动外排。
MDCK-MDR通透性分析有助于理解化合物外排的机理,并有助于在早期开发阶段发现药物通透性相关的问题。
MDCK-MDR通透性分析
除了预测化合物的肠壁通透性,也可以用于预测化合物穿过血脑屏障的能力。
hMDR1-MDCKⅡ细胞通透性实验
化合物需求量
2mg化合物粉末或100µL 10mM DMSO 溶液
测试浓度
10µM
细胞培养周期
3天
复孔数
N=2
孵育条件
在CO2 培养箱内37ºC孵育90分钟
Pgp 抑制剂
环孢素A
细胞完整性指标
TEER>200 Ω•cm2
分析方法
LC-MS/MS
数据报告
Papp, Efflux Ratio, %Recovery
计算公式
Papp = CRecx VRec/ (A x t x C0)
Efflux Ratio = Papp (B→A) /Papp (A→B)
Recovery = [(Vrec x Crec) + (Vd x Cd)] / (Vd x C0)
判断标准
Efflux >2.0 without Pgp inhibitor 判断为Pgp 底物
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