Barcoded Ba/F3 稳转激酶细胞系
Ba/F3细胞是一株来自小鼠的白血病细胞系，其独特性在于其体外增殖依赖于培养基中小鼠白介素3（mIL3）的刺激。如果将带有driver mutation的激酶转入Ba/F3细胞，则带有driver mutation的激酶可以驱动细胞的增殖，从而不再需要mIL3。Ba/F3转染过程简单，筛选结果可靠，因此广泛用于激酶抑制剂的筛选与表征。
由于每个小分子化合物的选择性和特异性都具有自身特点，因此详细表征候选分子对不同激酶的抑制活性对于后续的开发和适应症选择至关重要。在酶学水平，可以通过kinome profiling等方法评估化合物对不同激酶的抑制。但是在细胞学水平，目前尚无高通量筛选方案。
为了提高候选分子在细胞学水平的带有driver mutation的激酶的表征通量，我们开发了
Barcoded Ba/F3 Kinase Panel
（可以参考
Nat Biotechnol . 2016 April ; 34(4): 419–423. doi:10.1038/nbt.3460.
）。其实验流程如左图所示。首先将每一个激酶和一个对应的独特的barcode插入到慢病毒载体中，然后用慢病毒转染Ba/F3细胞中，构建表达该激酶并携带独特barcode的Ba/F3细胞系。在对每个细胞系进行鉴定后，将不同的细胞系混和，即可用于药物筛选。加入化合物处理后，提取对照组和处理组细胞的基因组DNA，并通过PCR扩增barcode DNA，然后用高通量的XMAP即可定量不同barcode DNA的丰度，从而可以推测出化合物对于不同激酶的抑制活性。
利用
Barcoded Ba/F3 稳转激酶细胞系
，可以在一个实验中筛选化合物对150个带有不同突变的激酶的细胞学活性，不仅大大缩短了实验成本，也显著减少了表征所需时间。拓维生物的目标是建立300个表达不同driver-mutation的激酶的Ba/F3细胞系。
欢迎联系我们索取更多相关信息。
